Определение группы крови цоликлонами

Цоликлоны – это группа специализированных антител, получаемых путем генетической инженерии. Ранее для их производства применялись специальные линии лабораторных грызунов. В организм животных вводился особый антиген, затем получали асцитную (внутрибрюшную) жидкость грызуна и специальными методами очищали ее. Это позволяло получить указанные антитела. Самые современные методы позволяют получать аналогичные антитела в клеточных культурах, без задействования лабораторных животных.

С позиции иммунологии цоликлоны относятся к антителам, направленным на острые реакции, то есть иммуноглобулинам М. При помощи этих белков можно провести реакции, сопровождающиеся формированием комплекса антиген-антитело, причем в качестве антигена выступают специфические мембранные белки, определяющие группу крови, а также Rh-фактор, располагающиеся на поверхности клеток крови.

Зачем назначается анализ

Одними из важных, обусловленных наследственно характеристик организма каждого человека являются резус-фактор и группа крови. Они не изменяются на протяжении всего срока жизни. Конкретная группа зависит от наличия или отсутствия определенных антигенов на клеточной мембране, а также биохимических параметров их жизнедеятельности.

Существует 4 распространенных группы, а Rh-фактор может присутствовать (+) или отсутствовать (-). Определение этих показателей особенно важно перед процедурой переливания крови. Ведь если человеку влить несовместимую кровь, это будет грозить смертельной опасностью. В результате иммунитет начнет интенсивно продуцировать антитела против перелитых эритроцитов. Поэтому важно определить антигенную совместимость перед проведением процедуры переливания.

Сейчас цоликлоны применяют в основном для точного определения группы и Rh-фактора пациента. Тестирование может осуществляться планово, по назначению специалиста, например, при поступлении в стационар, или экстренно, перед проведением гемотрансфузии.

В условиях поликлиник цоликлоны используют редко, обычно применяются сыворотки. Цоликлоны особенно полезны тогда, когда важна скорость проведения анализа или невозможно использовать обычные сыворотки.

Что такое цоликлон

Цоликлон является раствором моноклональных антигенов к специфическим мембранным белкам эритроцитов человека. Ранее для проведения исследований применялись агглютинирующие изоген-сыворотки. Применение цоликлонов позволяет повысить скорость, качество и точность анализа на определение группы биоматериала по системе АВО.

Современные цоликлоны являются продуктом гибридных клеточных линий, полученных путем слияния антителопродуцирующих лимфоцитов с клетками миеломы мыши. Генерируемые ими иммуноглобулины практически полностью повторяют структуру естественных антител. Клеточные колонии от первого клона, продуцирующие эти соединения, относятся к моноклональным, так как являются потомством единственной клетки. Также этим термином называются продуцируемые ими иммуноглобулины.

Получение таких колоний длительное время было сложнейшей задачей, так как необходимо было совместить возможность клетки вырабатывать огромное количество антител и способность к неограниченному размножению. Впервые это удалось выполнить в 1975 году, когда было получено слияние лимфоцитов и опухолевых клеток, размещенных в одной питательной среде. Соединившись с опухолевыми клетками (способными делиться бесконечно), лимфоциты передали им способность генерации нужных антител. Такие гибридомные колонии могут активно размножаться и вырабатывать в процессе жизнедеятельности нужные моноклональные антитела.

Как проходит процедура

Для осуществления тестирования с применением цоликлонов потребуется специальная поверхность – планшет для определения группы крови, сами пробы в жидком виде и собственно раствор цоликлонов. Для реакции подходит биоматериал, взятый из любых сосудов – как капиллярный, так и венозный или артериальный.

Алгоритм действий выглядит так:

1. Стороны планшета помечают, чтобы исключить ошибки с нанесением разных типов реагентов (во многих современных планшетах метки нанесены заранее).
2. Капают в лунку по одной капле цоликлонов и биоматериала. Важно, чтобы объем реактивов был примерно в десять раз больше количества использованной крови.
3. Ожидают 3–5 минут. В процессе ожидания осторожно покачивают планшет для обеспечения равномерного перемешивания жидкостей. Это предотвратит оседание эритроцитов по краям тестового образца, а также обеспечит лучшие условия для протекания реакции антиген-антитело.

Спустя три минуты можно провести оценку результатов или их отсутствия, что позволит с высокой надежностью определить групповую принадлежность биоматериала.

Расшифровка результатов

Исследование специфики антигенов эритроцитов и Rh-фактора является одной из рутинных процедур, которую проводят практически всем пациентам, проходящим лечение в условиях стационара. Анализ отличается простотой, процедура занимает не более 5 минут.

Таблица возможных сочетаний реакций антиген-антитело

Позитивная реакция проявляется в виде «склеивания» эритроцитов и оседания сформировавшихся скоплений клеток. В случае отсутствия реакции кровь остается жидкой, и форменные элементы не выпадают в осадок.

Как повысить точность исследования

Для обеспечения правильного протекания реакции и достижения высокой точности результатов нужно придерживаться ряда рекомендаций:

1. Цоликлоны требуется хранить в холодильнике, при температуре в диапазоне 2-8 °С. Крышка емкости должна плотно закрываться для предотвращения избыточного контакта с кислородом воздуха. Нарушение условий хранения может привести к потере антигенных свойств из-за разрушения сложных белковых молекул иммуноглобулинов.
2. Для проведения исследования запрещено применять реагенты с истекшим сроком годности (обычно составляет не более 1 месяца). Также недопустимо применение жидкостей, в которых появился осадок, посторонние включения или загрязнения.
3. Исследование нужно проводить в помещении, оборудованном качественным освещением, с температурой воздуха от 15 до 25 °С. Причем важна чистота, в воздухе не должны присутствовать пыль или другие загрязнения, способные привести к искажению результатов тестирования.
4. Нанося биоматериал и реагенты на планшет для определения группы крови, следует строго придерживаться рекомендованных пропорций. Если биоматериала будет больше, чем требуется, реакцию станет сложно дифференцировать, а при недостаточном объеме биоматериала она будет идти слишком медленно.
5. Недопустимо слияние капель крови, соединенных с различными цоликлонами. Если такая ситуация возникла, необходимо повторное проведение пробы. Также для смешивания реагентов с образцами биоматериала необходимо применять одноразовые палочки.

Важно учитывать, что реакция должна протекать около 3 минут. В сомнительных ситуациях возможно продолжение наблюдений перед оценкой результатов до 5–7 минут. Если с момента смешивания прошло более 10 минут, реакция считается недостоверной, так как за это время происходит подсыхание биоматериала и высока вероятность естественного выпадения форменных элементов крови в осадок. Достоверность такой пробы будет крайне низка.